一、排查前的基础确认
在开展系统性排查前,需要先排除几个容易被忽略的基础因素,避免无效拆解系统部件。
1、确认流动相状态
先检查当前使用的流动相是否存在缓冲盐析出、有机相比例突变或者长时间未脱气的情况,低温环境下缓冲盐溶解度下降,很容易在系统管路中析出结晶,造成局部堵塞。
2、确认仪器环境状态
查看实验室环境温度是否出现骤升骤降,仪器的压力传感器是否完成正常校准,避免因传感器数据偏差误判为柱压升高。
二、分段定位堵塞位置
柱压升高的核心诱因大多是系统内出现了局部堵塞,通过分段排查可以快速将故障范围缩小到具体部件。
1、卸下 色谱柱连接入口端的管路,启动仪器以正常流速运行,观察此时的系统空压。如果空压依然远高于正常参考值,说明堵塞点在色谱柱之前的系统管路、进样器或者保护柱位置。
2、如果卸下色谱柱后系统空压恢复到正常区间,说明堵塞点大概率集中在色谱柱本体,此时再进一步对色谱柱进行细分排查。
三、色谱柱本体的针对性处理
确认堵塞来自色谱柱后,可按照从易到难的顺序逐步处理,最大程度保留色谱柱的性能。
1、检查柱头筛板
柱头筛板是最容易被样品中的强保留杂质、颗粒物堵塞的位置,可在断开流动相后,小心取下柱头的筛板,用合适的溶剂进行反向冲洗,清理附着的杂质后再重新装回。
2、反向冲洗色谱柱
在确认色谱柱允许反向冲洗的前提下,使用低流速搭配强洗脱能力的溶剂,反向冲洗色谱柱30至60分钟,将沉积在柱头的杂质从柱体另一端带出,注意冲洗过程中不能超过色谱柱规定的最大耐受压力。
3、柱床修复操作
如果上述操作后柱压仍未恢复,可在低流速下用初始流动相充分平衡色谱柱,观察柱压的变化趋势,避免强行用高流速冲柱导致柱床出现塌陷。
四、后续的预防维护措施
完成故障排查和处理后,需要建立常规的维护习惯,从源头减少柱压异常的发生概率。
1、所有进样样品都要经过充分的过滤和前处理,去除样品中的不溶性颗粒物,避免杂质随进样过程进入色谱柱。
2、每次实验结束后,都要按照规范流程冲洗色谱柱,彻底清除柱内残留的缓冲盐和强保留物质,避免杂质长期沉积造成堵塞。